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论文类型：期刊论文

发表时间：2008-02-01

发表刊物：光谱学与光谱分析

收录刊物：SCIE、EI、PubMed、PKU、ISTIC、CSCD

卷号：28

期号：2

页面范围：426-429

ISSN号：1000-0593

关键字：肌红蛋白 定点突变 圆二色谱 蛋白质结构 结构稳定性

摘要：为了了解肌红蛋白Mb分子表面44位天冬氨酸对稳定肌红蛋白结构的影响,用PCR定点突变的技术将肌红蛋白(Mb)基因上的第44位天冬氨酸的密码子GAT突变成赖氨酸的密码子AAA,获得突变体D44K基因,将突变体基因克隆在肌红蛋白表达质粒pGYM上,转化大肠杆菌BL21,突变蛋白D44K在大肠杆菌中大量表达,收集菌体.酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀、离子交换柱层析、凝胶柱层析分离纯化得突变肌红蛋白D44K.用圆二色谱分别研究野生型肌红蛋白及其突变体(D44K)的耐热及耐酸的变性过程.实验结果表明:用碱性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44残基,增强了肌红蛋白耐热变性能力,导致蛋白质的热变性中点温度Tm由71.9 ℃增加到75.1 ℃,但对肌红蛋白耐酸变性的能力影响不大.